Набор для выявления антител к возбудителю НБ иммуноферментным методом


поиск по разделу «Ветаптека»



Название
Набор для выявления антител к возбудителю НБ иммуноферментным методом
Описание
 
Состав
В состав набора входят 9 компонентов (К1 — К9). Иммуноспецифические компоненты: К1 — положительная к вирусу НБ сыворотка крови кур (положительный контроль) цельная лиофилизированная, 1 мл или в нативном виде — 0,2 мл — 1 ампула (флакон); К2 — отрицательная сыворотка крови кур (отрицательный контроль), не содержащая антител к вирусу НБ, цельная, лиофилизированная, 1 мл или в нативном виде — 0,2 мл — 1 ампула (флакон); КЗ — очищенный антиген вируса НБ, адсорбированный в лунках планшета для ИФА — 2 планшета; К4 — антивидовой иммунопероксидазный конъюгат против lgG кур, сухой в объеме 0,5 мл или в нативном виде — 0,2 мл — 1 ампула, рабочее разведение 1: (указывается для каждой серии). Неспецифические компоненты: К5 — набор солей для приготовления буферного раствора для испытуемых и контрольных проб, антивидового конъюгата и межэтапной промывки: трис (оксиметил) аминометан — 0,97 г (К5.1), трис (оксиметил) аминометан гидрохлорид — 6,61 г (К5.2), натрий хлористый — 11,7 г (К5.3); К6 — набор солей для приготовлений субстратного буфера: натрий фосфорнокислый двузамещенный — 5,37 г — 1 флакон (К6.1), лимонная кислота — 1,57 г — 1 флакон (К6.2); К7 — детергент твин-20, жидкий — 1 мл — 1 флакон; К8 — субстрат — ортофенилендиамин, 1 таблетка во флаконе; К9 — перекись водорода, гидроперит, таблетка 1,0 г — 1 шт. в упаковке.
 
Фармакологическое действие
Сущность метода заключается в выявлении образовавшегося на поверхности лунок полистиролового планшета комплекса антиген-антитело. Специфический комплекс взаимодействует с антивидовым иммунопероксидазным конъюгатом против lgG кур и вызывает разложение субстрата, окрашивая содержимое лунок планшета. Для исследования в лабораторию доставляют из птицехозяйств сыворотки крови кур от 25 голов (по 0,2 — 0,3 мл). Пробы сывороток хранят в морозильной камере бытового холодильника.
Показания к применению
Для определения специфических антител против вируса ньюкаслской болезни (НБ) в сыворотках крови кур иммуноферментным методом (ИФМ).
Способ применения и дозировка
Для постановки метода ИФА используют: одно- и восьмиканальные автоматические пипетки постоянного и переменного объема до 0,02 мл и до 0,2 мл со сменными наконечниками, термостат с температурой нагрева (37 +/- 0,5 °С), бытовой холодильник, рН метр, ридер любой модели для учетов результатов ИФА. Перед приготовлением рабочих растворов набор с компонентами выдерживают 30 минут, при комнатной температуре (20 — 22 °С). Раствор 1. Содержимое флаконов К5.1, К5.2 и К5.3 растворяют в 1000 мл дистиллированной воды и измеряют показание рН, которое должно быть в пределах 7,4 — 7,6. Затем в этот раствор вносят содержимое флакона К7, получая конечную концентрацию детергента 0,01 %. Данный раствор используют для разведения контрольных сывороток, испытуемых проб, антивидового конъюгата и межэтапной промывки. Раствор 2. Фосфатно-цитратный буфер рН 4,9 — 5,0. Для приготовления буфера содержимое флакона К6.1 растворяют в 50 мл дистиллированной воды, содержимое флакона К6.2 также в 50 мл дистиллированной воды. Затем смешивают 24,3 мл раствора К6.1 с 25,7 мл раствора К6.2, добавляют 50 мл дистиллированной воды. Полученный раствор должен иметь рН 4,9 — 5,0, при необходимости добавляют кислый (К6.2) или щелочной (К6.1) компоненты. Раствор 3. Содержимое флакона К1 растворяют в 1,0 мл раствора 1. Готовят перед использованием. Сыворотка К1 в нативном виде готова для использования. Раствор 4. Содержимое флакона К2 с отрицательной сывороткой крови кур растворяют в 1,0 мл раствора 1. Раствор 4 готовят перед использованием. Сыворотка К2 в нативном виде готова для использования. Раствор 5. Содержимое флакона К4 с антивидовым конъюгатом растворяют в 0,5 мл раствора 1. Для получения рабочего разведения 1 : из этого флакона или из нативного препарата конъюгата отбирают мл на 10 мл раствора 1 (на 1 планшет), готовят перед использованием. Раствор 6. 1 таблетку гидроперита растворяют в 20 мл дистиллированной воды. Раствор 7. Субстратно-индикаторная смесь. Содержимое флакона К8 (таблетку) растворяют в 20 мл раствора 2, встряхивают до полного растворения и добавляют на каждые 10 мл этого раствора по 0,4 мл раствора 6. Готовят раствор 7 непосредственно перед использованием. В связи с высокой токсичностью ОФД приготовление субстратно-индикаторной смеси проводить в резиновых перчатках, избегая попадания на кожу и слизистые оболочки. Постановка реакции — Из комплекта набора берут планшет (К3), в лунках которого адсорбирован очищенный антиген вируса НБ, и используют для постановки иммуноферментного метода. Разведение сывороток: образцы исследуемых проб сывороток крови разводят 1 : 100 раствором 1. С этой целью к 0,01 мл сыворотки крови кур добавляют , 1,0 мл раствора 1 и перемешивают. В лунки рядов планшета В1 — 12... Н1 — 12 вносят по 0,1 мл раствора 1, а в лунки А2 — 11 вносят по 0,2 мл исследуемых проб сывороток крови, приготовленных по вышеописанному методу, и проводят раститровку по вертикальным рядам, начиная с 1 : 100 до 1 : 12800. В лунки А1 и А12 вносят разведения 1 : 100 контрольных (отрицательной и положительной) сывороток и также проводят раститровку по вертикальным рядам. Из последних лунок Н1 — Н12 удаляют по 0,1 мл. При обнаружении высоких титров антител в испытуемых пробах проводят раститровку по горизонтальным рядам планшета. Планшет осторожно встряхивают, закрывают крышкой и переносят в термостат на 37 °С на 2 часа. Затем лунки планшета освобождают от содержимого путем вытряхивания и трехкратно промывают раствором 1. Готовят раствор 5 по вышеописанному способу и вносят во все лунки планшета по 0,1 мл, затем опять помещают в термостат на 1 час и промывают как. Готовят раствор 7 по вышеописанному способу и вносят во все лунки по 0,1 мл. Оставляют при комнатной температуре в темном месте 5 — 10 минут. Останавливают реакцию добавлением в каждую лунку 0,05 мл серной кислоты, приготовленной путем растворения 2 мл концентрированной серной кислоты в 10 мл дистиллированной воды (в наборе отсутствует). Учет результатов анализа проводят после остановки реакции одним из способов: визуально — по интенсивности окрашивания содержимого лунок планшета или инструментально — с помощью спектрофотометра с вертикальным лучом при длине волны 492 нм. При визуальном способе учета первоначально проводят оценку результатов по контрольным лункам планшета: положительный контроль при раститровке окрашивается в желтый цвет различной интенсивности. В лунках с отрицательным контролем раствор остается неокрашенным или незначительно желтеет. При визуальном учете сравнивают окраску содержимого лунок планшета испытуемых проб с окраской лунок контрольных образцов. За титр испытуемой сыворотки принимают последнее разведение ее, при котором наблюдают видимое глазом цветовое окрашивание, более интенсивное по сравнению с отрицательным контролем. Инструментальный фотометрический учет результатов анализа позволяет количественно оценить титры специфических антител в исследуемых пробах путем измерения значений оптической плотности (ОП 492 нм). Конечным разведением испытуемой сыворотки считается последнее ее разведение, в котором оптическая плотность превышает таковую отрицательного контроля в 2,0 — 2,1 раза. Расчет титра сывороток при постановке реакции в одном разведении 1 : 400. Выявление специфических антител в сыворотках крови можно проводить и без раститровки испытуемых сывороток. В этом случае во все лунки планшета А2 — 12 ...Н2 — 12 вносят по 0,1 мл исследуемых проб сывороток в разведении 1 : 400 в одной или двух повторностях, используя по 1(2) лунки на каждую пробу. В две лунки В1, С1 вносят положительные, а в две последующие Д1, Е1 — отрицательные контрольные сыворотки в разведении 1 : 400. Лунки F1, G1, H1 служат контролем конъюгата и заполняются по 0,1 мл раствором 1. Учет результатов реакции проводится спектрофотометрически при длине волны 492 нм. Для предполагаемого варианта учета различия между средними значениями по ложительной и отрицательной контрольных сывороток (РСХ — NСх) должно быть более 0,5. Значения оптической плотности для отрицательного контроля должны быть менее или равны 0,150. Наличие или отсутствие антител к вирусу ньюкаслской болезни определяют путем вычисления отношения средней оптической плотности испытуемой сыворотки при длине волны 492 нм к среднему значению оптической плотности (ОП) положительного контроля (S/Р). Положительная контрольная сыворотка стандартизована и имеет определенный титр антител к вирусу ньюкаслской болезни. Если S/Р отношение меньше или равно 0,15, сыворотка будет считаться отрицательной. Если S/Р отношение больше, чем 0,15, сыворотка содержит антитела к ньюкаслской болезни. Конечное значение титра может быть подсчитано по S/Р-отношению при разведении 1 : 400. Расчет титра — Расчет среднего значения ОП отрицательного контроля (NСх): (Значение В1 ОП(492) Значение С1 ОП(492))/2 = NСх Пример: (0,100 0,120)/2 = 0,110 (NСx = 0,110) Расчет среднего значения ОП положительного контроля (РСх): (Значение D1 ОП(492) Значение E1 ОП(492))/2 = PCx Пример: (0,720 0,690)/2 = 0,755 (PCx = 0,755) Расчет S/Р отношения: (ОП(492) испытуемой сыворотки — NСх)/(PCx — NCx) = S/P Пример: Значение образца = 0,480 (0,480 — 0,110) / (0,755 — 0,110) = 0,370/0,645 = 0,574 (Значение S/Р = 0,574) Расчет титра. log10 Титр = 1,08(log10 S/Р) 3,92. Пример: S/Р отношение равно 0,574. log10 Титр = 1,08(log10 0,574) 3,92. log10 Титр = 1,08(-0,241) 3,92. log10 Титр= 3,660. Титр=103,660 =4571. Интерпретация результатов -по результатам ИФА определяют напряженность иммунитета в партии привитых цыплят путем деления количества проб с титром антител 1 : 800 и выше к общему количеству исследованных сывороток и выражают в процентах. Птицу считают иммунной к ньюкаслской болезни при напряженности иммунитета 80 и более процентов (т. е. если в 80 и более процентах проб сывороток крови титр антител достигает значения 1 : 800 и выше). Птицу вакцинируют (ревакцинируют) при напряженности иммунитета менее 80 %. Обнаружение высокого уровня антител (более 1 : 12800) свидетельствует о возможной циркуляции в стаде полевого вируса ньюкаслской болезни. В таких случаях через 21 — 30 дней проводят повторное исследование проб сывороток крови, полученных от этих же птиц. Снижение или стабилизация уровня антител и (или) уменьшение количества птиц с высоким уровнем антител при повторных исследованиях проб сывороток крови свидетельствует об отсутствии циркуляции в хозяйстве эпизоотического вируса и является следствием поствакцинальных реакций. Нарастание титров и (или) увеличение количества птиц с высоким уровнем антител при отсутствии клинических и патологоанатомических признаков НБ не является основанием для объявления в хозяйстве неблагополучия по данному заболеванию, но предусматривает установления за птицей тщательного наблюдения, проведением систематических серологических и вирусологических исследований. Обнаружение антител к вирусу ньюкаслской болезни у птиц, не привитых против НБ без клинических и патологоанатомических признаков заболевания свидетельствует о циркуляции природ неослабленных или вакцинных штаммов вируса ньюкаслской болезни и не является основанием для объявления хозяйства неблагополучным по НБ.
 
Противопоказания
Побочные действия
Взаимодействие с другими препаратами
Меры личной безопасности
Особые указания
Ампулы, флаконы без этикеток, с трещинами, с измененной консистенцией подлежат выбраковке, обеззараживанию и утилизации.
Период ожидания (каренция)
Форма выпуска
Набор рассчитан на проведение 176 анализов сывороток крови кур при исследовании в одном разведении 1 : 400, при раститровке сывороток от 1 : 100 до 1 : 12800 — на 20 анализов.
Хранение
В защищенном от света месте и температуре от 2 до 8 °С. Срок годности — 12 месяцев.
Производитель
Федеральный центр охраны здоровья животных ФГУ (ВНИИЗЖ ФГУ), Россия




сортировать



 

 

 
 
птицеводство
Webpticeprom птицеводство
 
Ветаптека для птиц
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
на сайте страниц: 15152