Набор для выявления антител к возбудителю РЕО иммуноферментным методом


поиск по разделу «Ветаптека»



Название
Набор для выявления антител к возбудителю РЕО иммуноферментным методом
Описание
 
Состав
В состав набора входят следующие компоненты — Иммуноспецифические компоненты (К): К1. Положительная к реовирусу сыворотка крови кур (положительный контроль), цельная, лиофилизированная, сухая пористая масса белого или светло-желтого цвета; 0,5 мл — 1 флакон или нативная, жидкость светло-желтого цвета, 0,2 мл — 1 флакон; К2. Нормальная сыворотка крови кур (отрицательный контроль), не содержащая антител к реовирусу, цельная, лиофилизированная, сухая пористая масса белого или светло-желтого цвета, 0,5 мл — 1 флакон или нативная, жидкость светло-желтого цвета. 0,2 мл — 1 флакон; К3. Очищенный антиген реовируса, адсорбированный в лунках планшета для ИФА 2 планшета; К4. Антивидовой иммунопероксидазный конъюгат против иммуноглобулинов кур, сухая пористая масса белого цвета, в объеме 0,5 мл — 1 флакон или в нативном виде, бесцветная жидкость — 0,2 мл — 1 флакон. Неспецифические компоненты: К5. Набор солей для приготовления буферного раствора для испытуемых и контрольных проб, антивидового конъюгата и межэтапной промывки, порошок белого цвета трис (оксиметил) аминометан — 0,97 г (К5. 1.); трис (оксиметил) аминометан гидрохлорид- 6 61 г (К5. 2.); натрий хлористый — 11,7 г (К5. 3.); — по 1 флакону; К6. Набор солей для приготовления субстратного буфера, порошок белого цвета натрий фосфорно-кислый двузамещенный 12-водный — 5,37 г (К6.1.); лимонная кислота — 1, 57 г (К6.2); — по 1 флакону; К7. Детергент: твин 20, вязкая тягучая маслянистая жидкость соломенно-желтого цвета, 1,0 мл — 1 флакон.; К8. Субстрат — ортотенилендиамин, 2 таблетки сероватого цвета, 8 мг во флаконе; К9. Гидроперит, таблетка белого цвета, 0,5 г или 0,75 г — 1 шт. в упаковке.
 
Фармакологическое действие
Сущность метода заключается в выявлении комплекса антиген-антитело на поверхности лунок полистиролового планшета. Образовавшийся специфический комплекс взаимодействует с антивидовым иммунопероксидазным конъюгатом против lgG кур и вызывает разложение субстрата, окрашивая содержимое лунок планшета. Интенсивность окраски прямо пропорциональна концентрации антител в исследуемом материале.
Показания к применению
Для определения специфических гуморальных антител возбудителю реовирусной инфекции птиц иммуноферментным методом.
Способ применения и дозировка
Для постановки реакции используют: одно- и восьмиканальные автоматические пипетки фиксированного и переменного объема до 0,02 мл и до 0,2 мл со сменными наконечниками, термостат с температурой нагрева 37 °С, бытовой холодильник, рН метр, ридер любой модели для учетов результатов ИФА. Перед приготовлением рабочих растворов набор с компонентами выдерживают 30 минут при температуре от 18 до 20 °С. Раствор 1. Содержимое флаконов К5.1, К5.2 и К5.3 растворяют в 1000 мл дистиллированной воды и измеряют показание рН, которое должно быть в пределах 7,4 — 7,6. Затем в этот раствор вносят содержимое флакона К7, получая конечную концентрацию детергента 0,01 %. Данный раствор используют для разведения контрольных сывороток, испытуемых проб, антивидового конъюгата и межэтапной промывки. Раствор 2. Фосфатно-цитратный буфер рН 4,9 — 5,0. Для приготовления буфера содержимое флакона К6.1 растворяют в 50 мл дистиллированной воды, содержимое флакона К6.2 также в 50 мл дистиллированной воды. Затем смешивают 24,3 мл раствора К6.1 с 25,7 мл раствора К6.2, добавляют 50 мл дистиллированной воды. Полученный раствор должен иметь рН 4,9 — 5,0 при необходимости добавляют кислый (К6.2) или щелочной (К6.1) компоненты. Раствор 3. Содержимое флакона К1 с положительной к реовирусу сывороткой крови кур растворяют в 1 мл раствора 1. Готовят перед использованием. Сыворотка в нативном виде готова к использованию. Раствор 4. Содержимое флакона К2 с нормальной сывороткой крови кур растворяют в 0,5 мл раствора 1. Раствор 4 готовят перед использованием. Сыворотка в нативном виде готова к использованию. Раствор 5. Содержимое флакона К4 с антивидовым конъюгатом растворяют в 0,5 мл раствора 1. Для получения рабочего разведения 1 : из этого флакона или из нативного препарата конъюгата отбирают мл на 10 мл раствора 1 (на 1 планшет), готовят перед использованием. Раствор 6. 1 таблетку гидроперита растворяют в 20 мл дистиллированной воды. Раствор 7. Субстратно-индикаторная смесь. Содержимое флакона К8 растворяют в 30 мл раствора 2, встряхивают до полного растворения и добавляют на каждые 10 мл этого раствора по 0,6 мл раствора 6. Готовят раствор 7 непосредственно перед использованием. В связи с высокой токсичностью ОФД приготовление субстратно-индикаторной смеси проводить в резиновых перчатках, избегая попадания на кожу и слизистые оболочки. Разведение сывороток. Образцы исследуемых проб сывороток крови, положительной (положительный контроль — раствор 3) и нормальной (отрицательный контроль — раствор 4) сывороток крови разводят 1 : 100 раствором 1. С этой целью к 0,01 мл сыворотки крови кур добавляют 1 мл раствора 1 и перемешивают. Постановка реакции. В лунки рядов планшета В1 — 12 ... Н1 — 12 вносят по 0,1 мл раствора 1, а в лунки А2 — 11 вносят по 0,2 мл исследуемых проб сывороток крови, и проводят раститровку по вертикальным рядам, начиная с 1 : 100 до 1 : 12800. В лунки А1 и А12 вносят разведения 1 : 100 контрольных (нормальной и положительной) сывороток и также проводят раститровку по вертикальным рядам. Из последних лунок Н1 — Н12 удаляют по 0,1 мл. При обнаружении высоких титров антител в испытуемых пробах проводят раститровку по горизонтальным рядам планшета. Планшет осторожно встряхивают, закрывают крышкой и переносят в термостат на 37 °С на 30 минут. Затем лунки планшета освобождают от содержимого путем встряхивания и трехкратно промывают раствором 1. Готовят раствор 5 и вносят во все лунки планшета по 0,1 мл, затем опять помещают в термостат на 30 минут и промывают. Готовят раствор 7 и вносят во все лунки по 0,1 мл. Оставляют при температуре от 18 до 20 °С в темном месте 5 — 10 минут. Останавливают реакцию добавлением в каждую лунку 0,1 мл серной кислоты, приготовленной путем растворения 1 мл концентрированной серной кислоты в 10 мл дистиллированной воды (в наборе отсутствует). Учет результатов анализа проводят после остановки реакции одним из способов визуально — по интенсивности окрашивания содержимого лунок планшета или инструментально — с помощью спектрофотометра с вертикальным лучом при длине волны 492 нм. Инструментальный фотометрический учет результатов анализа позволяет количественно оценить титры специфических антител в исследуемых пробах путем измерения значений оптической плотности (ОП 492 нм). Конечным разведением испытуемой сыворотки считается последнее ее разведение, в котором оптическая плотность превышает таковую отрицательного контроля в 2,0 — 2,1 раза. Интерпретация результатов. По результатам ИФА определяют напряженность иммунитета в партии привитых цыплят путем деления количества проб с титром антител 1 : 400 и выше к общему количеству исследованных сывороток и выражают в процентах. Птицу считают иммунной к реовирусной инфекции при напряженности иммунитета 80 и более процентов (т. е. если в 80 и более процентах проб сывороток крови титр антител достигает значения 1 : 400 и выше). Птицу вакцинируют (ревакцинируют) при напряженности иммунитета менее 80 %. Обнаружение уровня антител более 1 : 400 у не вакцинированной птицы свидетельствует о возможной циркуляции в стаде полевого реовируса. В таких случаях через 21 — 30 суток проводят повторное исследование проб сывороток крови, полученных от этих же птиц. Нарастание титров и (или) увеличение количества птиц с высоким уровнем антител при наличии клинических и патологоанатомических признаков реовирусной инфекции является основанием для объявления в хозяйстве неблагополучия по данному заболеванию.
 
Противопоказания
Побочные действия
Взаимодействие с другими препаратами
Меры личной безопасности
Особые указания
Период ожидания (каренция)
Форма выпуска
Набор рассчитан на проведение 20 анализов при раститровке сывороток от 1 : 100 до 1 : 12800.
Хранение
В защищенном от света месте и температуре от 2 до 8 °С. Срок годности — 12 месяцев.
Производитель
Федеральный центр охраны здоровья животных ФГУ (ВНИИЗЖ ФГУ), Россия




сортировать



 

 

 
 
птицеводство
Webpticeprom птицеводство
 
Ветаптека для птиц
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
на сайте страниц: 15152