Енгашев С.В., доктор ветеринарных наук, профессор, генеральный директор
Лесниченко И.Ю., главный ветеринарный специалист, «НВЦ Агроветзащита»
Ульянов И.В., и.о. заведующего микробиологической лабораторией
Михайлов В.В., доктор медицинских наук, профессор, директор по качеству, «НВЦ Агроветзащита С-П.»
Экологическое неблагополучие окружающей среды, интенсивное воздействие химических, физических, биологических агентов и их комплексов, нерациональное кормление, чрезмерное использование антибиотиков в животноводстве и птицеводстве создало условия для возникновения устойчивых штаммов патогенных микроорганизмов и снижения эффективности лечения инфекционных заболеваний.
Основным путём преодоления резистентности микроорганизмов традиционно считается создание новых антимикробных препаратов. Одним из эффективных способов их получения являются фармацевтические композиции из антибиотиков с различным механизмом действия, оказывающие влияние на различные структуры и физиологические процессы микробной клетки.
ООО «Ареал Медикал» разработало и зарегистрировало новый комплексный антибактериальный препарат Тиамулокс-Комби, содержащий 100 мг окситетрациклина гидрохлорида на 1 г композиции и З3 мг тиамулина гидрогенфумарата. Производство освоено на предприятии ООО «НВЦ Агроветзащита С-П.» (лицензия №00-11-1-001247 от 10.10.2011).
Комбинация тиамиулина гидрогенфумарата и окситетрациклина гидрохлорида обладает синергидным действием, блокирует синтез РНК и подавляет синтез белка на уровне рибосом, обеспечивая тем самым широкий спектр антибактериальной активности в отношении грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов, а также риккетсий и некоторых видов микоплазм.
При пероральной даче препарата окситетраци клин и тиамулин хорошо и быстро всасываются в кишечник и проникают в большинство органов и тканей животного, достигая максимальных концентраций через 1,5-3,0 ч; а выводятся главным образом с фекалиями и мочой, что определяет возможность его применения в составе кормов и кормовых добавок.
Результаты лечения свиней и птицы во время кормления гранулами, включающими этот антибактериальный препарат, подтверждают лучшую конверсию корма и более высокие приросты по сравнению с потреблением рационов без Тиамулокса-Комби.
Одной из технологических операций при производстве кормов является термическая обработка при различных температурных режимах, поэтому термостабильность добавок, вводимых в корма, имеет важное прикладное значение.
Цель настоящей работы — обоснование возможности включения лекарственного препарата Тиамулокс-Комби в корма, подвергающиеся термической обработке, изучение его антимикробной активности до и после прогревания при повышенной температуре.
Материалы и методы.
Изучение антимикробной активности препарата серии 110913 проведено в микробиологической лаборатории (лицензия №50.99.08.001 Л.00001 2.05.1 3 от 29.05.2013 г. на осуществление деятельности в области использования возбудителей инфекционных заболеваний человека и животных III-IV степени потенциальной опасности) до и после его инкубации при 90° С в течение 30 минут в электрошкафу сушильном ПЭ-4610 фирмы «Экохим» (г. С.-Петербург).
Исследования осуществлены в соответствии с рекомендациями Методических указаний макрометодом серийных разведений в бульоне в боксе биологической безопасности, разработанном в ЗАО «Ламинарные системы» (г. Миасс).
Использованы питательные среды производства «ГНЦ прикладной микробиологии и биотехнологии» №8 ГРМ (per. удост. № ФСР 2007/00839 от 27.12.201 1 г.) и №1 ГРМ (№ ФСР 2011/11415 от 27.12.2011 г.).
Тест-штаммы. В работе применяли культуры ПБА (патогенные биологические агенты), представленные в таблице 1.
Таблица 1. Перечень культур ПБА
Тест-штамм |
Источник получения |
S. aureus ATCC 6538Р (FDA 209Р) |
Всероссийская коллекция промышленных микроорганизмов «ГосНИИГенетики» |
Ps. aeruginosa ATCC 9027 |
|
Е. Coli ATCC 25922 |
|
Вас. subtilis ATCC 6633 |
|
Salmonella abony 103/39 |
ЦЭК МИБП ФГБУ «НЦ ЭСМП» Минздрава России |
Приготовление растворов. Навески препарата массой 1000 мг до и после прогревания растворили в 9 мл стерильной воды, очищенной с последующими серийными разведениями на питательной среде №8 ГРМ (табл. 2).
Таблица 2. Разведение исследуемого препарата
Концентрация препарата, мг/мл |
1000 |
10 |
5 |
0,3 |
0,15 |
0,7 |
0,03 |
0,015 |
Объём препарата, мл |
1 г |
0,1 |
6 |
6 |
6 |
6 |
6 |
6 |
Среда №8, мл |
- |
9,9 |
6 |
6 |
6 |
6 |
6 |
6 |
Примечание: В числителе — число пробирок с ростом ПБА, в знаменателе — число пробирок, используемых в опыте.
Посевные культуры тест-штаммов обогащали при 32,5° С в жидкой среде №8 в течение 22-24 ч, после чего готовили на среде №8 десятикратные разведения суточной культуры до 1:107.
Разведение 1:10000 использовали как инокулюм. При проведении исследования инокулюм вносили по 0,5 мл в пробирки с 0,5 мл образца препарата в разведении 1:10n с последующим определением инокулируемой дозы титрованием на среде №8.
Результаты исследования.
Титрование обогащённых культур тест-штаммов показало, что биологическая активность суточных культур (концентрация живых бактериальных клеток) составила от 106,0 до 107,5 КОЕ/мл (табл. 3).
Таблица 3. Результат определения биологической активности (БА) суточных культур тест-штаммов
Тест-штамм |
Разведен культуры тест-штамм, 10-n |
БА, КОЕ/мл |
|||
-4 |
-5 |
-6 |
-7 |
||
S. aureus |
4/4 |
4/4 |
4/4 |
4/4 |
107,5 |
Ps. aeruginosa |
4/4 |
4/4 |
4/4 |
4/4 |
106,0 |
Е. coli |
4/4 |
4/4 |
4/4 |
4/4 |
107,5 |
Salmonella abony |
4/4 |
4/4 |
4/4 |
4/4 |
106,5 |
Вас. subtilis |
4/4 |
4/4 |
4/4 |
4/4 |
107,5 |
Примечание: В числителе — число пробирок с роаом ПБА, в знаменателе — число пробирок, используемых в опыте.
Результаты оценки антимикробной активности препарата методом серийных разведений показаны в таблицах 4-6. Данные таблиц подтверждают наличие антимикробной активности препарата по отношению к грамположительной (S. aureus) и грамотрицательной микрофлоре (Ps. aeruginosa, Е. coli, Salm. abony), а также к спорообразующим микроорганизмам (Вас. subtilis).
Таблица 4. Антимикробная активность препарата до термообработки
Тест-штамм ПБА |
Концентрация препарата, мг/мл |
||||||||
2,5 |
1,25 |
0,6 |
0,3 |
0,15 |
0,07 |
0,03 |
0,015 |
0,007 |
|
S. aureus |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
Ps. aeruginosa |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
+ |
Е. coli |
- |
- |
- |
- |
- |
+ |
+ |
+ |
+ |
Salmonella abony |
- |
- |
- |
- |
- |
+ |
+ |
+ |
+ |
Вас. subtilis |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
Примечание: Здесь и далее + означает рост культуры в пробирке, - отсутствие роста. Биологическая активность инокулюма (EDSO/мл) составила для: S. aureus — 103,5;
Ps. aeruginosa — 104,0; Е. coli — 103,5; Salmonella abony — 103,5; Вас. subtilis — 103,5.
Таблица 5. Антимикробная активность препарата после термообработки
Тест-штамм ПБА |
Концентрация препарата, мг/мл |
||||||||
2,5 |
1,25 |
0,6 |
0,3 |
0,15 |
0,07 |
0,03 |
0,015 |
0,007 |
|
S. aureus |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
Ps. aeruginosa |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
+ |
E. coli |
- |
- |
- |
- |
- |
+ |
+ |
+ |
+ |
Salmonella abony |
- |
- |
- |
- |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
Вас. subtiiis |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
+ |
Таблица 6. Минимальная подавляющая концентрация препарата
Тест-штамм |
МПК препарата, мг/мл |
|
Без термообработки |
После термообработки |
|
S. aureus |
≤0,007 |
≤0,007 |
Ps. Aeruginosa |
0,015 |
0,015 |
Е. Coli |
0,15 |
0,15 |
Salm. Abony |
0,15 |
0,3 |
Вас. Subtilis |
≤0,007 |
0,015 |
Примечание: Величины МПК представлены по трем опытам
Прогревание при 90° С в течение 30 минут не влияет на антимикробную активность препарата Тиамулокс-Комби, что даёт возможность вводить его в состав кормов, технология производства которых включает термообработку.
Заключение. Лекарственный препарат Тиамулокс-Комби серии 110913 обладает in vitro выраженной антимикробной активностью по отношению к вегетативным (Е. coli, Salm. abony, S. aureus, Ps. aeruginosa) и споровым (Вас. subtilis) формам бактерий.
МПК препарата для испытуемых тест-микроорганизмов находится в диапазоне от ≤0,007 до 0,3 мг/мл.
Прогревание препарата при 90°С в течение 30 минут не оказывает отрицательного влияния на его антимикробную активность.
Производитель ООО «НВЦ Агроветзащита С-П.» гарантирует содержание активного комплексного антибактериального препарата в комбикорме после термической обработки при высоких температурах.
Источник: журнал «Птицеводство» №6, 2014 г.