Изучение термостабильности антибактериального препарата Тиамулокс-Комби

Енгашев С.В., доктор ветеринарных наук, профессор, генеральный директор

Лесниченко И.Ю., главный ветеринарный специалист, «НВЦ Агроветзащита»

Ульянов И.В., и.о. заведующего микробиологической лабораторией

Михайлов В.В., доктор медицинских наук, профессор, директор по качеству, «НВЦ Агроветзащита С-П.»

Экологическое неблагополучие окружающей среды, интенсивное воздействие химических, физиче­ских, биологических агентов и их комплексов, нерациональное кормление, чрезмерное использо­вание антибиотиков в животно­водстве и птицеводстве создало условия для возникновения устой­чивых штаммов патогенных мик­роорганизмов и снижения эффек­тивности лечения инфекционных заболеваний.

Основным путём преодоления резистентности микроорганизмов традиционно считается создание новых антимикробных препара­тов. Одним из эффективных спо­собов их получения являются фармацевтические композиции из антибиотиков с различным механизмом действия, оказывающие влияние на различные структуры и физиологические процессы мик­робной клетки.

ООО «Ареал Медикал» разрабо­тало и зарегистрировало новый комплексный антибактериаль­ный препарат Тиамулокс-Комби, содержащий 100 мг окситетрациклина гидрохлорида на 1 г композиции и З3 мг тиамулина гидрогенфумарата. Производ­ство освоено на предприятии ООО «НВЦ Агроветзащита С-П.» (лицензия №00-11-1-001247 от 10.10.2011).

Комбинация тиамиулина гидрогенфумарата и окситетрациклина гидрохлорида обладает синергидным действием, блокирует синтез РНК и подавляет синтез белка на уровне рибосом, обеспечивая тем самым широкий спектр антибакте­риальной активности в отношении грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов, а также риккетсий и некоторых ви­дов микоплазм.

При пероральной даче препара­та окситетраци клин и тиамулин хо­рошо и быстро всасываются в ки­шечник и проникают в большин­ство органов и тканей животного, достигая максимальных концент­раций через 1,5-3,0 ч; а выводятся главным образом с фекалиями и мочой, что определяет возмож­ность его применения в составе кормов и кормовых добавок.

Результаты лечения свиней и птицы во время кормления грану­лами, включающими этот антибак­териальный препарат, подтвер­ждают лучшую конверсию корма и более высокие приросты по сравнению с потреблением ра­ционов без Тиамулокса-Комби.

Одной из технологических опе­раций при производстве кормов является термическая обработка при различных температурных режимах, поэтому термостабильность добавок, вводимых в кор­ма, имеет важное прикладное значение.

Цель настоящей работы — об­основание возможности включе­ния лекарственного препарата Тиамулокс-Комби в корма, под­вергающиеся термической обра­ботке, изучение его антимикроб­ной активности до и после про­гревания при повышенной темпе­ратуре.

Материалы и методы.

Изучение антимикробной актив­ности препарата серии 110913 проведено в микробиологи­ческой лаборатории (лицензия №50.99.08.001 Л.00001 2.05.1 3 от 29.05.2013 г. на осуществление деятельности в области использо­вания возбудителей инфекцион­ных заболеваний человека и жи­вотных III-IV степени потенциаль­ной опасности) до и после его инкубации при 90° С в течение 30 минут в электрошкафу сушиль­ном ПЭ-4610 фирмы «Экохим» (г. С.-Петербург).

Исследования осуществлены в соответствии с рекомендациями Методических указаний макро­методом серийных разведений в бульоне в боксе биологической безопасности, разработанном в ЗАО «Ламинарные системы» (г. Миасс).

Использованы питательные сре­ды производства «ГНЦ приклад­ной микробиологии и биотехно­логии» №8 ГРМ (per. удост. № ФСР 2007/00839 от 27.12.201 1 г.) и №1 ГРМ (№ ФСР 2011/11415 от 27.12.2011 г.).

Тест-штаммы. В работе приме­няли культуры ПБА (патогенные биологические агенты), представ­ленные в таблице 1.

Таблица 1. Перечень культур ПБА

Приготовление растворов. На­вески препарата массой 1000 мг до и после прогревания раствори­ли в 9 мл стерильной воды, очи­щенной с последующими серий­ными разведениями на питатель­ной среде №8 ГРМ (табл. 2).

Таблица 2. Разведение исследуемого препарата

Примечание: В числителе — число пробирок с ростом ПБА, в знаменателе — число пробирок, используемых в опыте.

Посевные культуры тест-штаммов обогащали при 32,5° С в жидкой среде №8 в течение 22-24 ч, после чего готовили на среде №8 десяти­кратные разведения суточной культуры до 1:107.

Разведение 1:10000 использова­ли как инокулюм. При проведе­нии исследования инокулюм вносили по 0,5 мл в пробирки с 0,5 мл образца препарата в раз­ведении 1:10ⁿ с последующим определением инокулируемой дозы титрованием на среде №8.

Результаты исследования.

Титрование обогащённых куль­тур тест-штаммов показало, что биологическая активность суточ­ных культур (концентрация живых бактериальных клеток) составила от 10^6,0 до 10^7,5 КОЕ/мл (табл. 3).

Таблица 3. Результат определения биологической активности (БА) суточных культур тест-штаммов

Примечание: В числителе — число пробирок с роаом ПБА, в знаменателе — число пробирок, используемых в опыте.

Результаты оценки антимикроб­ной активности препарата мето­дом серийных разведений показа­ны в таблицах 4-6. Данные таблиц подтверждают наличие антимикробной активности препарата по отношению к грамположительной (S. aureus) и грамотрицательной микрофлоре (Ps. aeruginosa, Е. coli, Salm. abony), а также к спорообразующим микроорганизмам (Вас. subtilis).

Таблица 4. Антимикробная активность препарата до термообработки

Примечание: Здесь и далее + означает рост культуры в пробирке, - отсутствие роста. Биологическая активность инокулюма (EDSO/мл) составила для: S. aureus — 10^3,5;

Ps. aeruginosa — 10^4,0; Е. coli — 10^3,5; Salmonella abony — 10^3,5; Вас. subtilis — 10^3,5.

Таблица 5. Антимикробная активность препарата после термообработки

Таблица 6. Минимальная подавляющая концентрация препарата

Примечание: Величины МПК представлены по трем опытам

Прогревание при 90° С в течение 30 минут не влияет на антимик­робную активность препарата Тиамулокс-Комби, что даёт возмож­ность вводить его в состав кормов, технология производства которых включает термообработку.

Заключение. Лекарственный препарат Тиамулокс-Комби серии 110913 обладает in vitro выражен­ной антимикробной активностью по отношению к вегетативным (Е. coli, Salm. abony, S. aureus, Ps. aeruginosa) и споровым (Вас. subtilis) формам бактерий.

МПК препарата для испытуемых тест-микроорганизмов находит­ся в диапазоне от ≤0,007 до 0,3 мг/мл.

Прогревание препарата при 90°С в течение 30 минут не оказы­вает отрицательного влияния на его антимикробную активность.

Производитель ООО «НВЦ Агроветзащита С-П.» гарантирует содержание активного ком­плексного антибактериального препарата в комбикорме после термической обработки при вы­соких температурах.

Источник: журнал «Птицеводство» №6, 2014 г.