Оценка метаболической активности лейкоцитов птиц в постнатальном онтогенезе и при вирусных антигенных воздействиях


подписаться на рассылку анонсов статей:
 
 
поиск по разделу «Статьи»

всего статей: 1517


Оценка метаболической активности лейкоцитов птиц в постнатальном онтогенезе и при вирусных антигенных воздействиях



Е.Г. Турицына, кандидат ветеринарных наук, доцент, Красноярский ГАУ, г. Красноярск

Основной функцией лейкоцитов, в том числе и у птиц, является защита организма от генетически чужеродных тел, появляющихся в крови и тканях. Функции гранулоцитов, особенно нейтрофильных, связаны с наличием большого количества ферментов и основных белков, содержащихся в азурофильных и специфических гранулах. Кроме того, гранулоциты отличаются высоким уровнем энергетического обмена, в основе которого лежит утилизация гликогена, который используется ими как энергетический субстрат.

Изменения метаболической активности лейкоцитов могут быть связаны с возрастом, физиологическим состоянием и воздействиями различных факторов на организм птиц, в том числе инфекционных. Известно об ингибирующем влиянии многих вирусных инфекций на хемотаксис и бактерицидные способности гранулоцитов. Имеется возможность не только прямого влияния вирусов на клетки, но и последующее вторичное действие их продуктов на нейтрофилы. Некоторые вирусные инфекции сопровождаются транзиторной гранулоцитопенией, что убедительно показано в экспериментах на животных.

Недостаточность метаболической активности различных форм лейкоцитов может рассматриваться как фактор риска для развития патологических состоянии, сопровождающихся формированием вторичного иммунодефицита, поскольку именно на уровне клеток происходит формирование ответной реакции на воздействия различных факторов эндогенного и экзогенного происхождения.

Цель и методика исследований.

В связи с тем, что в условиях промышленных птицефабрик птица раннего постнатального возраста подвергается интенсивным воздействиям живых вакцинных вирусов, была поставлена цель - провести оценку метаболической активности лейкоцитов периферической крови цыплят первых 2-х месяцев жизни при иммунизациях. В задачи исследованиий входило изучение кислородзависимой биоцидности лейкоцитов по содержанию миелопероксидазы, кислороднезависимой бактерицидности по уровню лизосомально-катионных белков и энергетических возможностей лейкоцитов по количеству гликогена.

Материалом для исследований являлись мазки крови цыплят первых месяцев жизни породы «Хайсекс коричневый), приготовленные в разные сроки после плановых иммунизаций живыми вирусвакцинами, проводимых в условиях промышленного птицеводческого предприятия в соответствии с утвержденной схемой вакцинопрофилактики. Контролем служили мазки крови неиммунизированной птицы того же возраста.

Морфологический состав крови изучали на мазках, окрашенных комбинированным методом по Паппенгейму, миелопероксидазу исследовали по методу Грэхем-Кнолля с  отолидином или бензидином, гликоген изучали в ШИК-реакции с реактивом Шиффа по МакМанусу. Лизосомально-катионные белки определяли 0,1-процентным забуференным спиртовым раствором прочного зеленого марки C.1.42053 (производство «Диаэм») по  В.Е. Пигаревскому. Для определения миелопероксидазы и гликогена использовали стандартные наборы («Диахим-ЦитоСтеИн», Санкт-Петербург). Контролем при определении гликогена служили мазки крови, обработанные слюной, которые инкубировали при температуре 37 °С в течение 30 минут. При последующем окрашивании они давали отрицательную реакцию, так как гликоген расщеплялся амилазой слюны.

Полуколичественную оценку интенсивности цитохимических реакций проводили, используя принцип Астальди-Верга, основанный на выявлении различной степени интенсивности специфической окраски. В зависимости от нее исследуемые элементы делили на четыре группы: с отрицательной реакцией (-), слабо-положительной (+), положительной (++) и резко положительной (+++).

Определяли средний цитохимический коэффициент (СЦК) по L. Kaplow (1955) в модификации В.Е. Пигаревского, Ю.А. Мазинга. С этой целью дифференцировали 100 исследуемых клеток по указанной выше системе. Полученный процент клеток в каждой группе умножали на соответствующее данной группе число плюсов. Сумма этих величин, деленная на 100, представляла собой СЦК для одной клетки.

В тех случаях, когда изучаемые вещества локализовались в клетках в виде единичных гранул (например, гликоген в лимфоцитах), результат цитохимической реакции выражали в процентах клеток, дающих положительную реакцию. При проведении исследований были соблюдены стандартные условия обработки препаратов и единые критерии визуальной оценки для выведения количественных показателей учета, что в целом могло отражаться на результатах исследования.

Исследование мазков крови и микрофотографирование проведено на микроскопе МС 100 (Micros, Austria) фотокамерой САМ V200, совмещенной с компьютером при увеличениях объектива х40 и х100. Полученные данные обработаны методом вариационной статистики с использованием t-критерия Стьюдента.

Результаты исследований.

Лизосомально-катионные белки. Биологическое значение лизосомально-катионных белков (ЛКБ), по современным представлениям, довольно широко. Они обладают высокой антибактериальной активностью и участвуют в формировании противоинфекционной неспецифической резистентности организма. Дефицит катионных белков или их недостаточный синтез приводят к снижению функциональной активности лейкоцитов.

В процессе исследований установлена положительная реакция на катионные белки гранул гранулоцитов. В моноцитах и лимфоцитах лизосомально-катионный тест был отрицательным.

Лизосомально-катионный тест лейкоцитов у клинически здорового молодняка птиц первой недели жизни отличался крайне низкими показателями. Содержание ЛКБ в псевдоэозинофилах цыплят суточного возраста колебалось от 0,75 до 1,28 и в среднем составляло 1,02±0,09 ед. Преоб¬ладали клетки со слабоположительной (48%) и умеренной (33%) реакцией. От 2 до 6% клеток давали отрицательную реакцию. Ряд авторов расценивают показатели лизосомально-катионного теста до 1,5 ед. как характеризующие низкий уровень естественной резистентности. В 7-суточном возрасте у всех экспериментальных цыплят отмечали снижение уровня ЛКБ. У интактных цыплят разница с исходными показателями составила 12,7%, у привитых - 4,9%. Содержание ЛКБ у вакцинированных цыплят на 11,3% превышало результаты интактной птицы.

Антигенное воздействие живыми вирусвакцинами вызывало слабое понижение ЛКБ у молодняка 14-суточного возраста. У 21-суточных вакцинированных цыплят количество ЛКБ было на 16,3% ниже, чем в контроле (Р<0,05). По мере дальнейшего роста птицы содержание ЛКБ равномерно возрастало, достигая 1,6-2 ед. к 45-60-суточному возрасту, что соответствует показателям среднего уровня естественной резистентности. Достоверные отличия в этом показателе у привитой и интактной птицы в этот период отсутствовали. В псевдоэозинофилах наблюдались два типа катионных гранул: мелкие, дающие неравномерное светло-зеленое окрашивание цитоплазмы, и более крупные удлиненные светло- или темно-зеленые. Катионные гранулы в эозинофилах и базофилах имели ярко-зеленую окраску.

Миелопероксидаза. Одним из основных компонентов бактерицидной системы организма является миелопероксидаза, которую помимо пероксидазы образуют перекись водорода и ионы галоидов (хлора, брома и йода). Эта система является токсичной для бактерий, грибов, вирусов, микоплазм и хламидий.

Псевдоэозинофильные гранулоциты экспериментальных цыплят в первые три недели исследований показали отрицательную реакцию на пероксидазу. В возрасте 45-60 дней клетки демонстрировали слабое диффузное окрашивание цитоплазмы. В то же время гранулы эозинофилов и базофилов проявляли интенсивную положительную реакцию. Гранулы имели округлую форму и желто-коричневую окраску. О низком содержании либо о полном отсутствии миелопероксидазы в лейкоцитах у цыплят сообщает ряд авторов. В отличие от млекопитающих установлена положительная реакция на пероксидазу цитоплазмы эритроцитов птиц, что в настоящее время вызывает затруднение в объяснении этого эффекта.

Гликоген. Содержание гликогена как основного энергетического субстрата является важным показателем, определяющим способности клетки в осуществлении его функций. Молекула гликогена не имеет фиксированной структуры и находится в состоянии постоянного обмена глюкозных остатков. Ее размер варьирует в зависимости от потребности клетки в глюкозе в данный момент.

Исследование гликогена в клетках крови птиц показало, что количество ШИК-положительно реагирующих гранул и степень интенсивности их окраски зависит от возраста и функционального состояния птицы. У суточных цыплят наблюдали мелкие, пылевидные, едва заметные в световой микроскоп красноватые зернышки в цитоплазме гранулоцитов и тромбоцитов. СЦК составлял всего 0,26±0,03 ед. Около 12-14% гетерофилов крови, идентифицируемых по морфологической характеристике как палочковидные и юные гранулоциты, давали отрицательную реакцию, что является показателем функциональной незрелости этих клеток.

В процессе постнатального онтогенеза количество гликогена в лейкоцитах возрастало и к 60 суткам более чем в 2 раза превышало исходные показатели. Цитоплазма псевдоэозинофилов содержала ШИК-положительные гранулы двух видов: четко очерченные редко расположенные темно-вишневые гранулы удлиненной формы и мелкие округлые зерна красновато-розового цвета. У вакцинированного молодняка на 21-е и особенно на 30-е сутки содержание гликогена было ниже, чем в контроле (Р<0,05). Именно к этому периоду жизни количество антигенных стимуляций живыми вирусвакцинами возрастает до 5-6 обработок. К 45-60-суточному возрасту разница в содержании гликогена у привитой и интактной птицы не превышала 5-6%.

Лимфоциты крови цыплят первой недели жизни не содержали гликогена. На 14-21-е сутки после начала вакцинации 16-20% лимфоцитов содержали в цитоплазме гранулы гликогена. Считается, что наличие гликогена в цитоплазме лимфоцитов характерно для  В-клеток. Увеличение в крови этих клеток свидетельствует об иммунной перестройке, происходящей в организме привитой птицы. В эозинофилах наблюдали диффузное окрашивание цитоплазмы в красноватый цвет. При этом гранулы клеток давали ШИК-отрицательную реакцию. Интенсивность окраски цитоплазмы эозинофилов с возрастом и при антигенных раздражениях достоверных изменений не претерпевала. Гранулы базофилов всегда были ШИК-негативными.

Незначительные запасы гликогена в лейкоцитах крови птиц раннего постнатального возраста свидетельствуют о слабых потенциальных способностях к фагоцитозу, зависящих от имеющегося в клетке энергетического субстрата. Количество гликогена в псевдоэозинофильных гранулоцитах птиц на порядок меньше, чем у млекопитающих, что подтверждается работами ряда авторов.

Выводы:

Низкий уровень лизосомально-катионных белков и гликогена, отсутствие миелопероксидазы в клетках, отвечающих за фагоцитарные реакции, свидетельствуют о низкой естественной резистентности организма птиц раннего постнатального возраста.

Изменения метаболической активности лейкоцитов птиц при действии вирусвакцин носят разнонап¬равленный характер. Небольшие антигенные стимуляции активируют синтез и накопление катионных белков и энергетического субстрата в гетерофилах периферической крови, тогда как многократные антигенные воздействия ведут к снижению уровня гликогена и ЛКБ в этих клетках в определенные моменты жизни птицы, что является потенциально опасным, с точки зрения развития иммунопатологических состояний.







 

администрация сайта: ООО «Фаулер»
ждем ваших писем: deneb@webpticeprom.ru

 
птицеводство
Webpticeprom птицеводство
  1. Главная
  2. Статьи про птицеводство
  3. Болезни и лечение птиц
  4. › Оценка метаболической активности лейкоцитов птиц в постнатальном онтогенезе и при вирусных антигенных воздействиях
 
Болезни и лечение птиц
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
на сайте страниц: 13681