Г. Кузьмин, А. Скогорева,
К. Прибыткова, О. Попова, Воронежский ГАУ
Большую проблему для диагностических лабораторий и предприятий биологической промышленности, использующих в работе куриные эмбрионы (КЭ), представляют вирусы. Рядом исследователей были апробированы различные противовирусные препараты, вводимые в КЭ от ньюкаслской болезни. Это — динитрофенол, профлавин, иазиднатрия, PANS, хавизол, ивизол, гевизол, парметол. С. Першина (1996 г.) установила вирулицидное действие додецония и ломадена — препаратов из группы поверхностно-активных веществ на вирус гриппа типа А (концентрация 50 и 200 мкг/КЭ соответственно).
Несмотря на то, что такие вещества используют в практике длительное время, их эффективность до конца не выяснена. Мирамистин — препарат тоже из класса поверхностно-активных веществ — обладает бактерицидным, фунгицидным и вирулицидным действием, низкой токсичностью, отсутствием аллергенных, мутагенных, эмбриотоксических и канцерогенных свойств. Сведения о его действии на вирус ньюкаслской болезни в развивающихся куриных эмбрионах отсутствуют. Поэтому поставлена задача изучить влияние различных доз мирамистина на их жизнеспособность.
Работу проводили на кафедре эпизоотологии и вирусологии Воронежского ГАУ с октября по ноябрь 2007 года. Было отобрано 24 живых куриных эмбриона в возрасте 12 дней, из которых сформировано 6 групп, по 4 эмбриона в каждой. Введение препарата осуществляли в аллантоисную полость общепринятым методом. Пяти опытным группам ввели 0,01%-ный раствор мирамистина, выпускаемый ЗАО «Инфамед» (Москва), в дозах 0,1; 0,2; 0,3; 0,4 и 0,5 мл, что соответствует 10, 20, 30, 40 и 50 мкг/КЭ. Шестой группе (контрольной) препарат не вводили.
Из инкубируемых яиц вывелись 24 цыплёнка. Оценивали их состояние через 12-18 часов после вывода.
При внешнем осмотре цыплят всех групп не обнаружили видимых аномалий в развитии. Цыплята были подвижны, активно реагировали на звук, имели мягкий подобранный живот, закрытую пуповину без следов кровоизлияния, розовую чистую клоаку, хорошо пигментированный пух, глаза были ясные и блестящие. Живая масса цыплят — 36-40 г. В течение 10-дневного наблюдения цыплята активно принимали корм, масса тела к концу опыта составила 168-172 г в опытных группах и 164-168 г в контроле. На 10-й день птицу умертвили и вскрыли.
Визуально оценивали состояние внутренних органов: сердца, лёгких, печени, почек, желудка, кишечника и т.д. В контрольной и опытных группах органы располагались анатомически правильно, отклонений от нормы и в размерах, и строении не зарегистрировано. Далее для определения вирулицидного действия мирамистина на вирус ньюкаслской болезни использовали 66 КЭ в возрасте 1 3 дней. Было сформировано 2 группы, по 28 эмбрионов в каждой, в контрольной — 10. Первой группе инокулиро-вали вакцинный штамм вируса ньюкаслской болезни «Ла Сота» в разведениях 100; 50; 25; 12,5; 6,2; 3,1; 1,55 и 0,2 мл физиологического раствора. Второй группе вводили вирус в тех же дозах, заменяя физиологический 0,01%-ным раствором мирамистина в объёме 0,2 мл, а контрольной — 0,4 мл физиологического раствора. Заражение осуществляли через аллантоисную полость, каждым разведением инфицировали по 4 эмбриона.
В первой группе отмечали 1 00%-ную гибель эмбрионов в дозах 100, 50 и 25. Инфицированные 12,5 дозами вируса погибли 3 эмбриона; дозы 6,2 и 3,1 вызвали гибель по одному, при 1,55 гибели эмбрионов не было. Таким образом, в первой опытной группе под действием вируса погибло 17 эмбрионов. Они гиперемированы, отёчны, на голове и теле массовые точечные кровоизлияния.
Во второй группе (вирус ньюкаслской болезни + мирамистин) установили гибель только одного эмбриона при действии 100 доз вируса, остальные сохранили жизнеспособность благодаря ингибирующему действию препарата.
В контрольной группе павших куриных эмбрионов не обнаружено.
После 7 дней инкубации все КЭ были умерщвлены, затем вскрыты, отобран материал для реакций гемагглютинации (РГА) и торможения гемагглютинации (РТГА), а также бактериологического контроля.
Из органов эмбрионов, заражённых одной дозой вируса (п = 4), готовили 20%-ную суспензию по общепринятой методике. Для обнаружения вируса ставили пластинчатую реакцию гемагглютинации, а затем — развёрнутую. В положительных случаях проводили РТГА для подтверждения наличия вируса ньюкаслской болезни.
В первой группе РГА была положительной в материале от всех групп при разведении вируссодержащего материала от 1:2 до 1:128. Во второй группе она положительна только в материале от эмбриона, заражённого 1 00 дозами вируса (в разведении 1:2, 1:4). Реакция гемагглютинации с материалом, полученным в контрольной группе, была отрицательной.
На основании полученных результатов сделали следующие выводы: введение мирамистина в дозах 0,1; 0,2; 0,3; 0,4 и 0,5 мл не вызывает гибели эмбрионов и не влияет на вывод цыплят, их дальнейший рост и развитие.
Раствор мирамистина 0,01%-ный при введении в эмбрион обеспечивает 1 00%-ную сохранность при заражающем объёме вируса в 50 доз и ниже, что подтверждается отрицательной РГА и РТГА. Установленный вирулицидный эффект препарата против вируса ньюкаслской болезни открывает перспективу его использования для санации куриных эмбрионов.
