Действие мирамистина на вирус ньюкаслской болезни

Г. Кузьмин, А. Скогорева,

К. Прибыткова, О. Попова, Воронежский ГАУ

Большую проблему для диагностических лабораторий и предприятий биологической промышленности, использу­ющих в работе куриные эмбрионы (КЭ), представляют ви­русы. Рядом исследователей были апробированы различ­ные противовирусные препараты, вводимые в КЭ от нью­каслской болезни. Это — динитрофенол, профлавин, иазиднатрия, PANS, хавизол, ивизол, гевизол, парметол. С. Першина (1996 г.) установила вирулицидное действие додецония и ломадена — препаратов из группы поверх­ностно-активных веществ на вирус гриппа типа А (конце­нтрация 50 и 200 мкг/КЭ соответственно).

Несмотря на то, что такие вещества используют в прак­тике длительное время, их эффективность до конца не выяснена. Мирамистин — препарат тоже из класса по­верхностно-активных веществ — обладает бактерицид­ным, фунгицидным и вирулицидным действием, низкой токсичностью, отсутствием аллергенных, мутагенных, эмбриотоксических и канцерогенных свойств. Сведения о его действии на вирус ньюкаслской болезни в развиваю­щихся куриных эмбрионах отсутствуют. Поэтому постав­лена задача изучить влияние различных доз мирамистина на их жизнеспособность.

Работу проводили на кафедре эпизоотологии и вирусо­логии Воронежского ГАУ с октября по ноябрь 2007 года. Было отобрано 24 живых куриных эмбриона в возрасте 12 дней, из которых сформировано 6 групп, по 4 эмбри­она в каждой. Введение препарата осуществляли в аллантоисную полость общепринятым методом. Пяти опытным группам ввели 0,01%-ный раствор мирамистина, выпуска­емый ЗАО «Инфамед» (Москва), в дозах 0,1; 0,2; 0,3; 0,4 и 0,5 мл, что соответствует 10, 20, 30, 40 и 50 мкг/КЭ. Шестой группе (контрольной) препарат не вводили.

Из инкубируемых яиц вывелись 24 цыплёнка. Оценива­ли их состояние через 12-18 часов после вывода.

При внешнем осмотре цыплят всех групп не обнаружи­ли видимых аномалий в развитии. Цыплята были подвиж­ны, активно реагировали на звук, имели мягкий подоб­ранный живот, закрытую пуповину без следов кровоизли­яния, розовую чистую клоаку, хорошо пигментированный пух, глаза были ясные и блестящие. Живая масса цып­лят — 36-40 г. В течение 10-дневного наблюдения цыпля­та активно принимали корм, масса тела к концу опыта составила 168-172 г в опытных группах и 164-168 г в контроле. На 10-й день птицу умертвили и вскрыли.

Визуально оценивали состояние внутренних органов: сердца, лёгких, печени, почек, желудка, кишечника и т.д. В контрольной и опытных группах органы располагались анатомически правильно, отклонений от нормы и в раз­мерах, и строении не зарегистрировано. Далее для опре­деления вирулицидного действия мирамистина на вирус ньюкаслской болезни использовали 66 КЭ в возрасте 1 3 дней. Было сформировано 2 группы, по 28 эмбрионов в каждой, в контрольной — 10. Первой группе инокулиро-вали вакцинный штамм вируса ньюкаслской болезни «Ла Сота» в разведениях 100; 50; 25; 12,5; 6,2; 3,1; 1,55 и 0,2 мл физиологического раствора. Второй группе вводи­ли вирус в тех же дозах, заменяя физиологический 0,01%-ным раствором мирамистина в объёме 0,2 мл, а контрольной — 0,4 мл физиологического раствора. Зара­жение осуществляли через аллантоисную полость, каж­дым разведением инфицировали по 4 эмбриона.

В первой группе отмечали 1 00%-ную гибель эмбрионов в дозах 100, 50 и 25. Инфицированные 12,5 дозами ви­руса погибли 3 эмбриона; дозы 6,2 и 3,1 вызвали гибель по одному, при 1,55 гибели эмбрионов не было. Таким образом, в первой опытной группе под действием вируса погибло 17 эмбрионов. Они гиперемированы, отёчны, на голове и теле массовые точечные кровоизлияния.

Во второй группе (вирус ньюкаслской болезни + мира­мистин) установили гибель только одного эмбриона при действии 100 доз вируса, остальные сохранили жизне­способность благодаря ингибирующему действию пре­парата.

В контрольной группе павших куриных эмбрионов не обнаружено.

После 7 дней инкубации все КЭ были умерщвлены, за­тем вскрыты, отобран материал для реакций гемагглютинации (РГА) и торможения гемагглютинации (РТГА), а так­же бактериологического контроля.

Из органов эмбрионов, заражённых одной дозой виру­са (п = 4), готовили 20%-ную суспензию по общепринятой методике. Для обнаружения вируса ставили пластинчатую реакцию гемагглютинации, а затем — развёрнутую. В по­ложительных случаях проводили РТГА для подтвержде­ния наличия вируса ньюкаслской болезни.

В первой группе РГА была положительной в материале от всех групп при разведении вируссодержащего матери­ала от 1:2 до 1:128. Во второй группе она положительна только в материале от эмбриона, заражённого 1 00 дозами вируса (в разведении 1:2, 1:4). Реакция гемагглютинации с материалом, полученным в контрольной группе, была отрицательной.

На основании полученных результатов сделали следую­щие выводы: введение мирамистина в дозах 0,1; 0,2; 0,3; 0,4 и 0,5 мл не вызывает гибели эмбрионов и не влияет на вывод цыплят, их дальнейший рост и развитие.

Раствор мирамистина 0,01%-ный при введении в эмбри­он обеспечивает 1 00%-ную сохранность при заражающем объёме вируса в 50 доз и ниже, что подтверждается отри­цательной РГА и РТГА. Установленный вирулицидный эф­фект препарата против вируса ньюкаслской болезни открывает перспективу его использования для санации куриных эмбрионов.