Рекомендации по применению тимогена для лечения физиологически незрелых цыплят (гипотрофиков) в ранние сроки постнатального онтогенеза


поиск по разделу «Статьи»

всего статей: 1518


Рекомендации по применению тимогена для лечения физиологически незрелых цыплят (гипотрофиков) в ранние сроки постнатального онтогенеза



Рекомендации разработаны Н.В.Садовниковым, С.И.Лютинским, Г.П.Грачевой

Введение

В последние годы успешно развивается новое научное направление - биорегулирующая терапия, где наряду с традиционными лекарственными средствами предусматривается использование новых биорегулирующих препаратов - цитомединов, представляющих собой пептиды с молекулярной массой 1000 - 10 000 Да. Цитомедины участвуют в регуляции функциональной активности тех клеточных популяций, которые послужили исходным материалом для их выделения. Пептидные медиаторы способны влиять не только на здоровые клетки, они оказывают положительное воздействие и на метаболические процессы в клетках поврежденных, нормализуя их функции. К настоящему времени цитомедины выделены из почти из всех тканей и органов животного организма, однако наиболее полно изучена функциональная активность пептидных биорегуляторов из органов иммунной системы. Созданные на их основе лекарственные препараты способствуют сохранению и восстановлению нарушенного гомеостаза. В результате обширных экспериментальных исследований цитомединов, выделенных из тимуса, была определена наиболее активная фракция, на основе которой создан высокоэффективный синтетический лечебный препарат - тимоген.

Как и в других отраслях животноводства, в птицеводстве намечают перспективные пути применения биорегуляторных пептидов. Это профилактика заболеваний, повышение адаптационных возможностей у цыплят, ускорение структурно-функционального становления их тканей, органов, организма в целом.

Целью предпринятого исследования было изучение количественных характеристик неспецифической резистентности цыплят разной степени физиологической зрелости после экзогенного применения им тимогена, его влияние на рост и развитие птицы.

Методы исследований иммунной и кроветворной системы у цыплят

2.1. Подсчет морфологических показателей крови у цыплят

Подсчет эритроцитов и лейкоцитов осуществляли одновременно в камере Горяева по общепринятой методике, для чего кровь разводили красителем в меланжере для эритроцитов. Лейкоциты окрашивались в фиолетовый цвет, тогда как эритроциты оставались неокрашенными. Для подсчета количества миелокариоцитов брали красный костный мозг большеберцовой кости, гомогенизировали в изотоническом растворе и разбавляли 3% уксусной кислотой, используя камеру Горяева. Остальные гематологические показатели определяли общепринятыми методиками.

Содержание Т-клеток выявляли реакцией на альфа-нафтил-бутиратэстеразу (Higgy et al., 1978).

2.2. Определение содержания иммуноглобулина G в сыворотке крови цыплят

Определяли содержание IgG в сыворотке крови цыплят по методу радиальной иммунодиффузии по Fahey and Mc Kelvey с помощью моноклональных антител по методу Манчини (1965) в модификации Л.С. Колабской (1980). Его принцип заключается в образовании кольца преципитации в результате взаимодействия смеси агара с антисывороткой к IgG и антигена исследуемой сыворотки крови цыплят, внесенной в лунки агаровой пластинки.

Площадь преципитата прямо пропорциональна количеству внесенного в лунку антигена и обратно пропорциональна концентрации антител в агаре. При этом между концентрацией испытуемого антигена и площадью преципитата имеется линейная зависимость.

2.3. Методы исследования иммунокомпетентной (ИКС) системы у цыплят

Кусочки исследуемых органов фиксировали в жидкости Карнца и по общепринятой методике заливали в парафин. Срезы толщиной 5 мкм окрашивали гемотоксилин-эозином.

Проводили морфометрию органов и клеток. С помощью окулярной сетки определяли плотность клеток на единице площади и размеры коркового, мозгового вещества и диаметр фолликулов, лимфоидных органов.

О состоянии пролиферативных процессов в иммунокомпетентных органах судили по величине пролиферативного пула (S+G2/M) клеток (доля клеток, находящихся в стадии синтетических реакций и стадии деления).

Цитофлуориметрическое определение количества ДНК в ядрах клеток проводили с помощью метода проточной цитометрии. Измеряли от 5 тыс. до 10 тыс. клеток через 2-3 часа после окраски. На основе анализа полученных ДНК-гистограмм определяли плотность клеточных ядер с распределением анализируемой клеточной популяции по периодам митотического цикла.

Влияние Тимогена на рост и развитие цыплят разной степени физиологической зрелости

В пятисуточном возрасте отбирали здоровых интактных цыплят и цыплят с низкой степенью физиологической зрелости (гипотрофики), которых отсортировывали по малой массе тела, слабой подвижности, увеличенному животу, слипшемуся загрязненному пуху, цианозу слизистых оболочек. Всего было сформировано 4 группы по 50 голов в каждой: 1-я - интактные цыплята (нормотрофики); 2-я - цыплята в состоянии гипотрофии (контроль); 3-я - гипотрофичные цыплята, получившие в 5-ти суточном возрасте аэрозольным методом введения дозу тимогена из расчета 400 мкг на 1м3 (опыт), и 4-я группа, состоящая из физиологически незрелых цыплят, которым внутримышечным методом однократно вводили 10 мкг/кг массы тела 0,01% раствор тимогена.

Для физиологически незрелых цыплят отставание массы тела для данного возраста от массы тела нормальных цыплят считалось значительным, если разница составляла две величины среднего квадратического отклонения массы тела в группе гипотрофичных цыплят и средней величиной массы тела по группе состоящей из здоровых цыплят.

Наблюдение за динамикой роста и развития цыплят в ранний постнатальный период жизни указывает на наличие дефицита массы тела у цыплят из группы цыплят-гипотрофиков (контроль) на протяжении всего опытного периода (табл.1).

В то же время обращает на себя внимание тот факт, что в опытных группах цыплята-гипотрофики, подвергавшиеся аэрозольной обработке тимогеном, уже к 30 суткам набирали массу тела, соизмеримую с таковой у здоровых цыплят.

В последующие сроки исследования достоверных различий массы тела цыплят опытных групп и массой тела здоровых цыплят не определялось.

Под воздействием тимогена, через 25 суток после его введения у цыплят-гипотрофиков происходило увеличение количества эритроцитов (1,85 ±0,04*1012/л), лейкоцитов (26,6±3,1х109/л) Р<0,02, с преобладанием в периферической крови Т-лимфоцитов (54,8±1,2%).

Таблица 1. Изменение массы тела цыплят-гипотрофиков в постнатальном онтогенезе

Величина гематокрита и концентрация гемоглобина также были достоверно выше у цыплят, для лечения которых применялся синтетический пептид тимуса, по сравнению в аналогичными показателями цыплят-гипотрофиков контрольной группы (30,0±1,4% и 27,6±0,6% - Р<0,05; 1,18±0,04 ммоль/л и 1,09 ±0,003 ммоль/л- Р<0,05, соответственно).

В то же время интактные цыплята гипотрофики отставали в приросте живой массы на 20% (Р<0,05) от величины соответствующего показателя цыплят опытных групп. Через 55 суток после введения тимогена у цыплят опытных групп в крови увеличивалось количество эритроцитов до 2,16±0,10*1012/л - 2,45±0,20*1012/л, Р<0,05, по сравнению с количеством эритроцитов у цыплят-гипотрофиков в контрольной группе (1,49±0,18*1012/л). Концентрация гемоглобина и гематокритная величина в крови цыплят опытных групп приближалась в этом возрасте к таковым величинам крови у клинически здоровых цыплят. Средняя концентрация гемоглобина в одном эритроците (СКГЭР) возрастала в крови цыплят опытных групп до 25,0±1,9%, Р<0,05 и заметно отличалась по величине от цыплят-гипотрофиков контрольной группы (22,2 ±0,5%).

К этому возрасту у цыплят опытных групп в красном костном мозге увеличивалось и количество миелокариоцитов (463,0±12,29*109/л) по сравнению с их количеством в костном мозге у цыплят-гипотрофиков контрольных групп (343, 2±15,02*109/л).

Количество лейкоцитов в периферической крови также было выше (29,3±3,0*109/л, Р<0,025) по сравнению с количеством лейкоцитов в крови у физиологически незрелых цыплят контрольной группы (12.5±1,10*109/л).

В 16-ти суточном возрасте у цыплят-гипотрофиков определялось низкое содержание IgG в сыворотке крови физиологически незрелых цыплят контрольной группы (3,1±0,1г/л, Р<0,001) по сравнению с количеством иммуноглобулина G в сыворотке крови у здоровых цыплят (4,5±0,1 г/л). У цыплят-гипотрофиков опытных групп уровень иммуноглобулина G был выше, начиная с 16-ти и до 30-ти суточного возраста (4,3±0,4 - 6,36±0,4 г/л), Р<0,025.

В 60-ти суточном возрасте у цыплят всех групп происходило повышение количества иммуноглобулина G в среднем на 42% (Р<0,05), по сравнению с их количеством в крови у цыплят более ранних сроков постнатального периода. Максимальным их количество было 4,5±0,8 - 7,9±0,9 г/л у цыплят опытных групп; у цыплят в состоянии гипотрофии было 7,3±0,7 г/л; у клинически здоровых цыплят - 5,8±0,1г/л.

К 90-та суточному возрасту цыплят опытных групп наблюдалось повышение IgG на 20,3% (Р<0,05), у клинически здоровых цыплят (нормотрофиков) на 34,4% (Р<0,05), а у цыплят в состоянии гипотрофии количество IgG не менялось по сравнению с их количеством в сыворотке крови у 60-ти суточных цыплят.

Из этого видно, что аэрозольное и внутримышечное введение тимогена гипотрофичным цыплятам в 5-ти суточном возрасте индуцировало повышение IgG в сыворотке крови у физиологически незрелых цыплят в ранние сроки постнатального онтгогенеза.

Влияние тимогена на морфофункциональное состояние иммунокомпетентной системы (ИКС) физиологически незрелых цыплят

4.1. Морфофункциональное состояние тимуса, селезенки и бурсы Фабрициуса у цыплят гипотрофиков оценивали с помощью морфометрического метода, гистохимии и методом проточной ДНК-цитометрии у цыплят в ранние сроки постнатального онтогенеза.

Установлено, что в 15-ти суточном возрасте у гипотрофичных цыплят снижена величина пролиферативного пула клеток в бурсе Фабрициуса на 31% (Р<0,001), селезенки на 33% (Р<0,01) и в крови на 39,7% (Р<0,05). Величина пролиферативного пула клеток в тимусе гипотрофичных и здоровых цыплят существенно не различалась. Однако в возрасте 30-ти суток у цыплят-гипотрофиков контрольной группы обнаружено в тимусе уменьшение ширины коркового вещества (147,0±8,1мкм, Р<0,05), и клеточности коркового (62,0±2,0 на 100 мкм2, Р<0,05) и мозгового вещества (36,0±1,5 на 100 мкм2, Р<0,001), по сравнению с таковыми величинами структур тимуса у здоровых цыплят.

В селезенке уменьшены размеры лимфоидных фолликулов на 13,9% (Р<0,05) и на 37,0% (Р<0,01) снижено количество лейкоцитов в красной пульпе органа. В бурсе Фабрициуса сужена ширина коркового вещества (26,1±0,8мкм, Р<0,025) и мозгового (167±4,9 мкм, Р<0,001) вещества и уменьшена клеточность коркового вещества на 18% (Р<0,001), по сравнению с таковыми показателями у здоровых цыплят.

Аэрозольное и внутримышечное введение тимогена в дозе 400мкг/м3 и 10мкг/кг цыплятам-гипотрофикам опытных групп приводило к увеличению пролиферативных процессов в тканях (ИКС) через 10-25 суток. Величина пролиферативного пула клеток в лимфоидных органах увеличивалась до уровня показателей здоровых цыплят.

Так в 15-ти суточном возрасте у цыплят опытных групп была обнаружена стимуляция пролиферативных процессов в бурсе Фабрициуса на 158% и в селезенке на 83,3%.

Это приводило и к нормализации морфометрических показателей в тканях ИКС, так ширина коркового вещества в тимусе опытных цыплят была 283,0±20,3мкм, после введения 10 мкг/кг и 280,0±12,3 мкм, после введения 400мкг/м3; ширина мозгового вещества увеличивалась в тимусе до 500,0±31,0мкм, после введения 5-ти суточным цыплятам 10мкг/кг тимогена и до 400,0±20,0 мкм, после введения 400мкг/м3 тимогена.

К 30 суткам отмечалось общее снижение активности пролиферативных процессов в лимфоидных органах. В бурсе Фабрициуса у цыплят опытных групп в возрасте 30-ти суток установлено увеличение ширины коркового вещества до 57,0±2,9 мкм, после применения 10мкг/кг и до 32,7±1,4 мкм после применения тимогена в дозе в 400 мкг/м3, ширина мозгового вещества была увеличена до 184,0±5,0мкм.

В селезенке происходила нормализация показателей характеризующих состояние белой пульпы, однако количество лейкоцитов в красной пульпе оставалось сниженным на 28,3% (Р<0,05).

Таким образом, наблюдение за развитием и ростом цыплят во время опыта показало отставание в приросте массы тела у цыплят-гипотрофиков контрольной группы. В центральных и периферических органах иммунной системы у цыплят этой группы наблюдалось торможение пролиферативных процессов, снижение показателей гемограммы, Т-лимфоцитов в периферической крови, низкое содержание IgG - глобулинов в сыворотке крови.

Введение аэрозольным путем тимогена физиологически незрелым цыплятам в 5-ти суточном возрасте стимулировало активность пролиферативных процессов в иммунных органах и приводило к нормализации лимфопоэтической функции и улучшению показателей периферической крови.

Полученные нами данные могут служить подтверждением того, что предположение об иммунорегулирующем действии тимогена и других препаратов, полученных из тимуса, направлено на ускорение превращения костномозговых предшественников Т-клеток в тимоциты, а на этапе созревания ускорение их дифференцировки в системе Т- и В-лимфоцитов. У цыплят-гипотрофиков опытных групп к месячному возрасту постнатальной жизни нормализовались не только показатели белой крови, но и число эритроцитов увеличивалось до уровня величин здоровых цыплят. В органах ИКС происходила структурно-функциональная перестройка, направленная на повышение иммунологической реактивности у цыплят. Существенно улучшились показатели гуморального иммунитета. Нормализация состояния иммунной системы цыплят-гипотрофиков сопровождалась снижением дефицита живой массы тела в опытных группах, что и дало основание для применения тимогена в качестве патогенетического средства для лечения цыплят-гипотрофиков на ранних стадиях постнатального периода жизни.

Среднесуточный прирост живой массы за 90 дней у цыплят-гипотрофиков контрольной группы составил в среднем 9,3 гр.; у цыплят-гипотрофиков опытной группы - 13,9 гр.; у здоровых цыплят контрольной группы - 12,8 грамма. Сохранность поголовья увеличивалась на 1,8 - 2,4%.

Практические предложения

5.1 Тимоген может применяться в птицеводстве в качестве иммуномодулятора, так как после его применения у физиологически незрелых цыплят повышался пролиферативный пул клеток в иммунных органах (тимусе, бурсе Фабрициуса, селезенке), а также ускорялось их структурно-функциональное становление, повышалась жизнеспособность ослабленного молодняка и усиливалась интенсивность их роста.

5.2. Аэрозольный и внутримышечный методы введения тимогена дают равнозначные результаты воздействия на иммунные органы у гипотрофичных цыплят.

5.3. Тимоген, используемый в виде аэрозоля при концентрации 400 мкг/м3 следует применять после сортировки ослабленным цыплятам на 5-7 сутки постнатальной жизни с экспозицией 45 минут, в специализированном герметизированном помещении. В камеру объемом 30 м3 загружается 6 тыс. цыплят и в ней распыляется 60 мл - 0,01% раствора тимогена с добавлением адъюванта глицерина аппаратом САГ - 1.

5.4. При необходимости, гипотрофичные цыплята могут быть подвергнуты повторной обработке тимогеном в 15-17-ти суточном возрасте путем индивидуальных внутримышечных инъекций из расчета 10мкг/кг живой массы. С этой целью берут 2,5 мл - 0,01% раствора тимогена и добавляют его к 500 мл стерильного изотонического раствора натрия хлорида. Внутримышечно на одного цыпленка вводят 0,1 мл раствора тимогена на каждые 50 граммов массы тела.

www.vettorg.ru






 

 

 
 
птицеводство
Webpticeprom птицеводство
  1. Главная
  2. Статьи про птицеводство
  3. Болезни и лечение птиц
  4. › Рекомендации по применению тимогена для лечения физиологически незрелых цыплят (гипотрофиков) в ранние сроки постнатального онтогенеза
 
Болезни и лечение птиц
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
на сайте страниц: 15152